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志贺氏菌显色培养基是用于食品、病人粪便样品中志贺氏菌的快速检测。志贺氏菌显白色或无色,有些宋内氏志贺氏菌有蓝色中心;大肠杆菌和大肠菌群显绿色或黄色;沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心;其它细菌显蓝绿色或黄色。变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长;是一种很理想的快速检测培养基。
成份 (g/L) :
特殊营养物质 |
70.2 |
混合显色剂 |
0.4 |
琼脂 |
15.0 |
pH 7.3±0.1 25℃ |
此配方可以进行改良或增加营养成份以获得最佳的结果。
注意:此培养基仅供实验室使用。
用法:称取本品 17.12g 加入200ml蒸馏水,加热煮沸溶解并不停搅拌,加热1分钟左右。冷却至45-50℃时,倾入无菌平皿。
注意:制备好的培养基注意保持表面干燥,可在36±1℃的培养箱中倒置放置1-2小时。
贮存:制备好的平板可保存 2-5 天,应避免光线直接照射。干燥培养基应放置于阴暗干燥处, 保存温度 2-8 ℃,注意避光保存。
失效:干燥培养基超过保质期、结块和颜色变化都不能使用。
操作步骤:1、按GB标准、SN标准、FDA标准或其它方法制备样品液;
2、取25克样品液加入225ml GN增菌液或志贺氏菌增菌肉汤中,按标准规定时间增菌培养; 3、用3mm接种环取1环增菌液,划线接种到志贺氏菌显色培养基上,做2个平板;
4、36±1℃培养20-24h,志贺氏菌显白色或无色,有些宋内氏志贺氏菌有蓝色中心;大肠杆菌和大肠菌群显绿色或黄色;沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心;其它细菌显蓝绿色或黄色。变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长;
5、对典型菌落做全套生化试验和志贺氏菌血清学试验。
质量控制:1 、外观:此干燥培养基的粉末均匀,具有良好的流动性,呈灰白色至淡粉色。制备好的平板呈红色固体培养基。
2 、微生物试验:在 36 ± 1 ℃培养 20 ~ 24h 小时:
质控菌株 |
菌株号 |
生长情况 |
菌落颜色 |
福氏志贺氏菌 |
ATCC12022 |
+++ |
白色或无色,菌落直径1-3mm |
痢疾志贺氏菌 |
CMCC51252 |
+++ |
白色或无色,菌落直径1-3mm |
鲍氏志贺氏菌 |
CMCC51582 |
+++ |
白色或无色,菌落直径1-3mm |
宋内氏志贺氏菌 |
CMCC 51592 |
+++ |
白色或无色,菌落直径1-3mm,有蓝色中心 |
金黄色葡萄球菌 |
ATCC25923 |
- |
/ |
大肠杆菌 |
ATCC25922 |
+++ |
绿色菌落 |
沙门氏菌 |
ATCC14028 |
+++ |
无色菌落且黑色中心 |
奇异变形杆菌 |
ATCC12453 |
-/+ |
无色,菌落直径<1mm |
肺炎克雷伯氏菌 |
ATCC10031 |
++ |
绿色菌落 |
弗氏柠檬酸盐杆菌 |
ATCC43864 |
+++ |
绿色菌落 |
铜绿假单胞菌 |
CICC10211 |
-/+ |
无色,菌落直径<1mm |
方法的局限性:本培养基上的典型志贺氏菌必须做生化试验或血清学试验。
检验原理:利用非志贺氏菌的特异性的酶,使其与酶底物结合形成不同颜色的菌落,而生化特性反应不活跃的志贺氏菌经22~28h培养后,则形成易于识别的白色-粉红色(与培养基颜色相近)的菌落。志贺氏菌呈白色/清晰的菌落,大小约为1~3mm,周围培养基变红。
典型特征:志贺氏菌显白色或无色,有些宋内氏志贺氏菌有蓝色中心;大肠杆菌和大肠菌群显绿色或黄色;沙门氏菌显黄色或无色并有黑色中心;其它细菌显蓝绿色或黄色。变形杆菌和铜绿假单胞菌基本不生长。
志贺氏菌显色培养基的微生物灵敏度试验:按标签用法制备培养基,接种以下质控菌株,放置36±1℃需氧培养20-24小时。